常见化学发光分类在临床检验中的应用

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【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2011)05－0241－01

【摘 要】化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射强度确定物质含量的一种痕量分析方法,这种技术日益得到重视,它灵敏度高,线性范围宽,不需要外来光源,仪器设备简单,操作方便,分析快速快,易实现自动化,价格便宜,选择性强.常用的化学发光技术有电化学发光、化学发光免疫分析、微粒子化学发光等.本文主要探析此技术在临床检验中的应用.

【关 键 词】化学发光分类临床应用

化学发光(chemiluminescence,CL)早在19世纪80年代就得到证实,即在化学反应过程中瞬间以释放光子的形式放出能量.化学发光法因其灵敏度高、线性范围宽和分析速度快等优点,已在医学检验中得到广泛地应用.

一化学发光的基本内涵

化学发光分析法是近30年来发展起来的一种高灵敏的微量及痕量分析法,化学发光分析具有灵敏度高、线性范围宽、不需要外来光源、分析速度快、仪器设备相对简单、便宜等优点.化学发光分析测定物质的方式可分为直接法和间接法.化学发光分析反应类型可分为酶促反应和非酶促反应两类.此外化学发光分析法可以与其他分析技术联用,如流动注射分析、电化学分析、免疫分析、固定化试剂技术、传感器技术等分析技术相结合.

二常用的化学发光技术

首先,电化学发光.该技术是通过对电极施加一定的电压进行电化学反应而发光,通过测量化学发光光谱和强度来测定物质含量的一种痕量分析方法.它将电分析化学手段和化学发光方法相结合,具有独特的优点,如重现性和灵敏度进一步提高,在多种组份同时存在时,可施加不同波形、不同电压的信号进行选择性测量等,是潜在的分析手段之一.

第二,化学发光免疫分析是以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法,具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单、操作方便、分析速度快和容易实现自动化等优点.鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶是目前化学发光免疫分析中使用最多的标记物.

第三,微粒子化学发光是化学发光免疫分析的特殊形式,是以化学发光剂为底物的酶免疫技术,同时应用了磁性微珠做固相载体,增加了吸附面积,使抗原抗体最大限度的结合.微粒子化学发光技术所需标本量极少,孵育时间大大缩减,同时因其选择性吸附抗原,从而提高了特异性、灵敏性,使测定结果准确、可靠,并减少污染.

第四,化学发光生物传感器是通过非创伤或非损伤性的办法,连续、实时、动态地检测生物体内的某一种或几种物质浓度的技术.特别是化学发光免疫传感器是将具有分子识别作用的抗原或抗体以适当的方式固定化而制成,它结合了化学发光高灵敏度和抗原抗体特异性结合的高度专一性以及无污染等特点,是替代放射免疫分析的重要分析工具,已日益受到重视.

三化学发光分析在临床实验室中的应用

第一,化学发光法与血液系统疾病,化学发光免疫分析在测定G一C上是敏感的,可用于测定正常人或疑有G一C减少疾病的患者血清G一C,对于预测免疫抑制剂治疗再障的效果有一定的作用.例如,慢性骨髓增生性疾病,如慢性髓性白血病和真性红细胞增多症(Pv)是与中性白细胞功能失常有关的.Pv的PMN在用趋化肤(fMLP)刺激后化学发光值及丁量减少.这与磷醋酶D活性受损有关.而没有或用PMA刺激的化学发光值及了量是正常的.慢性髓性白血病患者也可观察到这个现象,但程度更小.

第二,化学发光法与消化系统疾病.幽门螺杆菌(HP)在慢性胃炎和消化性溃疡的发病中起着重要作用.病理组织学研究显示已感染HP的胃粘膜具有吸引中性白细胞积聚的特点.在鲁米诺增强的化学发光反应土表现为增强；溃疡性结肠炎患者结肠粘膜面虽然有中性白细胞浸润.但有人发现溃疡性结肠炎患者和正常人相比,在发光的峰值、峰时、斜率方面无明显差异.仅27%具有活动性溃疡性结肠炎患者刺激物有增高的化学发光.可能的原因是在这些患者中性白细泡不起主要作用或者不呈高活动性.慢性肝病(特别是肝癌时)0:的产生和HZOZ一MPO一CL一系统是抑制的.依赖Cypridina虫荧光素类的化学发光及依赖鲁米诺的化学发光均是降低的.但是慢性肝炎由于体内免疫复合物含量的增高而诱导发光增强,与正常组相比基础化学发光增强.急性肝炎由于体内免疫复合物增加不明显,吞噬细胞应答能力及血清调理活性均未明显受损.因此,急性肝炎的基础发光、峰时、斜率与正常人相比变化不明显,但单位PMN峰值低于正常,说明急性肝炎中性粒细胞的吞噬功能也降低；

第三,化学发光法可以准确检测心血管疾病.例如,急性心肌梗时,中性粒细胞的化学发光值逐渐升高且与CK山条高度相关.因此,可通过患者PMN一CL的变化估计病情.冠心病心绞痛时化学发光值是升高的.

第四,化学发光法与内分泌疾病.首先,甲状腺疾病.甲状腺激素是临床许多疾病(尤其是甲状腺疾病)诊断常用的指标.甲状腺激素(TH)具有抗氧化作用,这种作用可能是由于中性白细胞特异的受体一配体相互作用引起的.TH的抗氧化作用可通过鲁米诺增强的化学发光法测定,化学发光值表现为抑制.第二,糖尿病.患者由于可溶性或颗粒性因素激活多形核白细胞(PMN)膜上的NADPH氧化酶产生超氧阴离子自由基,然后转变为过氧化氢和轻自由基.糖尿病患者分离的PMN的基础化学发光值与正常人相比明显升高.但当NADPH氧化酶被抑制或磷酸己糖旁路被阻断,则糖尿病组及正常组的化学发光值均受到不同程度的抑制.NO可用多种方法测定,但化学发光法是其中最为理想的一种.NO本身不产生化学发光,当它与超氧阴离子反应时可产生很强的光,外源的精氨酸加入反应系统中,化学发光值会更显著地提高.糖尿病患者的化学发光值还可体现循环免疫复合物的水平.具有高循环免疫复合物的患者,化学发光值也高.